科普：免疫亲和柱的原理及使用要点

免疫亲和柱原理：

通过化学偶联技术将特异性抗体或抗原固定在琼脂糖、聚丙烯微球等不溶性载体上，形成亲和层析介质。样品经提取液提取、过滤、稀释，然后通过键合有特异性抗体的免疫亲和柱。此时，分析目标物被亲和柱中的抗体特异性吸附，用水或缓冲液将免疫亲和柱上的杂质洗脱去除，然后用甲醇使抗体变性，从而将目标物从亲和柱上洗脱下来。之后，将洗脱下来含有分析目标物的溶液用检测仪器进行定量检测。

免疫亲和柱使用要点：

1、上柱的样品溶液应该保持酸碱中性，若偏酸或偏碱，可用PBS稀释调节；

2、样品添加回收试验时，标准品添加到样品中，静置2小时或过夜，再进行样品前处理，否则会出现回收率偏低的现象；

3、亲和柱样品过柱洗脱速度要慢且均匀，约每秒1-2滴；

4、注意亲和柱的柱容量，若超过柱容量，上柱前请稀释；

5、如果将标准品直接过柱验证回收率时，一定要确保标准上柱液中有机浓度不要超过25%，否则会影响柱子的吸附能力。

6、储存条件为4℃-8℃，切忌0℃以下的低温，因为缓冲液冻结，会严重影响亲和柱内的物理结构，对质量影响很大，同时注意柱内保护液面，若泄露导致琼脂干燥，请勿使用；

7、试验中使用的玻璃仪器等，一定要清洗干净，尤其是用次氯酸等处理过的仪器，否则会使检测结果偏低。